· PolyacrylamidGel muss durch Acrylamidmonomer, Polymerisations -Ausgangsmaterial, Katalysator und das Recht des Salz- und Puffermischs zusammen.
· Acrylamidund Bis (N, N '- Methylen-Doppel-Acrylamid) ist die Monomerform-Gelmatrix.
· Ammonium -Persulfat -Klebstoffpolymerisationsprozess. Die Formulierung des Klebers erfordert 10% Ammonium -Persulfatlösung, die in Wasser hergestellt wurden. Die meisten Informationen zeigten einen aktiven Gebrauch. Die 10% ige Lösung kann jedoch für mehrere Wochen ohne signifikanten Aktivitätsverlust bei 4 ° C platziert werden. Machen Sie bis zu 10 ml und entsorgen Sie, wenn der Kleber nicht zu aggregieren kann.
Tipp: Der Prozentsatz vonAcrylamidBei Sequenzierung ist Kleber und Proteinkleber nicht gleich. Wenn Sie vorgefertigte Acrylamid: Bis Lösung verwenden, erhalten Sie sicher, dass Sie die richtige Flasche erhalten.
· Temed (n, n, n ', n'- Tetramethylethylendiamin) ist ein Katalysator in einer braunen Flasche, die in den Kühlschrank gelegt wird. Fügen Sie kurz vor dem Gießen von Kleber hinzu.
· Die Polyacrylamidelektrophorese verwendetes Glas in der Elektrophorese sollte vor und nach jedem Mal gewaschen werden. Nach der Elektrophorese mit einem weichen Bürsten und einem Tuch in heißem Seifenwasser waschen, mit destilliertem Wasser abspülen und zum Trocknen stehen.
· Feuchtigkeit und Staub können mit hohlem Polymer verursachen. Reinigen Sie die Glasplatte vor der Elektrophorese mit Glasreiniger und wischen Sie sie mit einer weichen Bürste ab. Mit destilliertem Wasser waschen und gründlich mit einem Papierwischwischtrocken trocknen. Das Spülen mit 70% Ethanol vor dem Wischen mit Papier hilft beim Reinigen und Beschleunigen des Trocknens. Fügen Sie nacheinander Proben von Acrylamid hinzu: Bis, Wasser, Pufferlösung, Ammonium -Persulfat, temporiert. Gut schütteln und sofort gießen.
Vor der Polymerisation ist es nicht notwendig, Polyacrylamid zu entgassieren. (Acrylamid wurde früher in ein Vakuum gestellt, um Blasen zu entfernen, weil Sauerstoff die Polymerisation hemmt.)
Horizontale Klebstoffpunkt -Probe -Tipps.
· Legen Sie ein Stück schwarzes Papier in die untere Box, einen schwarzen Hintergrund, um ein Beispielloch zu erstellen, um klarer zu sehen.
· Puffer mit Klebetank, direkt über dem Kolloid.
· Wenn die Kante ein Licht hat, schalten Sie die Lichter ein, lassen Sie das Licht kolloid. Zeichnen Sie die Probe in die Pipette.
· Mit automatischer Pipettierungsvorrichtung.
· In den meisten Punkten auf der Probe kann in 10-200 MU 1 Flüssigkeitsbewegungspunkt verwendet werden. Für sehr kleine Probenlöcher (weniger als 10 μ1) ist der für den Sequenzierungskleber verwendete lange Pipettenkopf bequemer.
· Pipettierung nur in die Probe eingetaucht und sich langsam bewegende Flüssigkeit einatmen. Die Probe kann mit Glycerin klebrig erscheinen, und das schnelle Pumpen kann Luftblasen in den Pipettenkopf ziehen.
· Proben nach dem Einatmen des Pipettierkopfes bewegen sich flüssiger Kopf vorsichtig am Rand des Rohrs oder wischten Papier mit flüssigem Kopf außerhalb der Tröpfchen. Achten Sie darauf, die Probe nicht zu saugen.
Legen Sie die Probe in das Probenloch
· Pipettiervorrichtung, um einen kleinen Druck beizubehalten, bewegen Sie die Proben leicht den Überlauf -Flüssigkeitskopf.
· Der in den Puffer eingeführte Pipettierkopf, etwas höher als die Löcher, behalten den positiven Druck auf. Die Spitze der Pipette kann in ein kleines Loch eingeführt werden.
· Langsam und stetig die Proben heraus. Die Pipettenspitze ist über dem Punktprobenloch platziert und die Probe sinkt in das Loch. Lassen Sie die Probe sinken, um das Probenloch zu füllen, anstatt hineinzudrängen.
· Sobald der letzte Tropfen mit flüssigem Kopf mit flüssigem Kopf bewegt wird, bewegt sich die Flüssigkeit in das zweite Bein, erhöhen Sie langsam die Flüssigkeitsbewegung, bewegen Sie sich aus dem Puffer
Wie mache ich vertikale Klebstoffabtastung?
· Vertikale Klebstoffpunktlöcher, die zwischen zwei Glasstücken gebildet wurden. In sehr dünnem Kleber kann der Pipettenkopf nicht einmal zwischen zwei Glasplatten eingeführt werden. Beobachten Sie den Glycerin! Legen Sie den Pipettenkopf über das Probenloch und die Probe sinkt in das Loch.
· Stellen Sie vorher unbedingt die vertikale Stelle des Polypropylen -Acylgel -Probenlochs ab, das sauber sauber ist. Waschen Sie das unpolymerisierte Acrylamid und das Wasser, das am Boden des Probenlochs auftreten kann, weg. Das Wasser kann das Probenloch erheblich kleiner machen. Verwenden Sie eine 25 ml oder 50 ml Spritze und eine 18-Gauge-Nadel. Gießen Sie den Elektrophorese -Puffer ein und spülen Sie das Probenloch vorsichtig.
· Es kann schwierig sein, das Probenloch zu erkennen, aber gleichzeitig ist der Rest einfach. Wenn es überschüssige Löcher gibt, kann der Probenpuffer mit Bromphenolblau getestet werden.
Postzeit: März 31-2023