· PolyacrylamidDas Gel muss aus Acrylamidmonomer, Polymerisationsausgangsmaterial, Katalysator und der richtigen Salz- und Puffermischung bestehen.
· Acrylamidund BIS (N,N'-Methylendoppelacrylamid) ist die Monomerform der Gelmatrix.
Ammoniumpersulfat leitet den Polymerisationsprozess des Klebstoffs ein. Die Klebstoffformulierung erfordert eine 10%ige Ammoniumpersulfatlösung in Wasser. Die meisten Informationen wiesen auf eine aktive Anwendung hin. Die 10%ige Lösung kann jedoch mehrere Wochen bei 4 °C ohne nennenswerten Aktivitätsverlust aufbewahrt werden. Füllen Sie auf 10 ml auf und entsorgen Sie diese, wenn der Klebstoff nicht aggregiert.
Tipp: Der Prozentsatz vonAcrylamidSequenzierkleber und Proteinkleber sind nicht dasselbe. Achten Sie bei Verwendung einer vorgefertigten Acrylamid-BIS-Lösung auf die richtige Flasche.
· TEMED (N, N, N', N'-Tetramethylethylendiamin) ist ein Katalysator in einer braunen Flasche, die im Kühlschrank aufbewahrt wird. Kurz vor dem Eingießen des Klebstoffs hinzufügen.
· Das bei der Polyacrylamid-Elektrophorese verwendete Glas sollte vor und nach jeder Elektrophorese gewaschen werden. Nach der Elektrophorese mit einer weichen Bürste und einem Tuch in heißem Seifenwasser waschen, mit destilliertem Wasser abspülen und trocknen lassen.
Feuchtigkeit und Staub können Hohlräume im Polymer verursachen. Vor der Elektrophorese die Glasplatte mit Glasreiniger reinigen und mit einer weichen Bürste abwischen. Mit destilliertem Wasser abwaschen und mit einem Papiertuch gründlich trocknen. Spülen mit 70%igem Ethanol vor dem Abwischen mit Papier hilft bei der Reinigung und beschleunigt die Trocknung. Acrylamidproben nacheinander hinzufügen: BIS, Wasser, Pufferlösung, Ammoniumpersulfat, TEMED. Gut schütteln und sofort abgießen.
Es ist nicht notwendig, Polyacrylamid vor der Polymerisation zu entgasen. (Früher wurde Acrylamid in ein Vakuum gegeben, um Blasen zu entfernen, da Sauerstoff die Polymerisation hemmt.)
Horizontale Klebepunkt-Musterspitzen.
· Legen Sie ein Stück schwarzes Papier in die untere Schachtel mit schwarzem Hintergrund, um ein paar Löcher zu machen, damit Sie besser sehen können.
· Leimtank gefüllter Puffer, knapp über dem Kolloid.
· Wenn der Rand beleuchtet ist, schalten Sie das Licht ein, damit das Kolloid leuchtet. Ziehen Sie die Probe in die Pipette.
· unter Verwendung eines automatischen Pipettiergeräts.
· In 10–200 µl Flüssigkeit kann an den meisten Punkten der Probe ein beweglicher Punkt verwendet werden. Für sehr kleine Probenlöcher (weniger als 10 µl) ist der lange Pipettenkopf, der für den Sequenzierungskleber verwendet wird, praktischer.
· Pipettieren Sie kurz in die Probe eingetaucht und atmen Sie die langsam fließende Flüssigkeit ein. Die Probe kann durch Glycerin klebrig erscheinen, und durch schnelles Pumpen können Luftblasen in den Pipettenkopf gelangen.
· Nach dem Einatmen der Probe den Pipettierkopf bewegen und den Flüssigkeitskopf vorsichtig am Rand des Rohrs oder mit Wischpapier entlang saugen, um die Flüssigkeit aus den Tröpfchen zu saugen. Achten Sie darauf, die Probe nicht anzusaugen.
Platzieren Sie die Probe in der Probenöffnung
· Halten Sie beim Pipettieren einen leichten Druck aufrecht, damit die Proben leicht über den Flüssigkeitskopf hinaus bewegt werden.
· Der Pipettierkopf wird in den Puffer eingeführt, etwas höher als die Löcher des Punkts, und hält den Überdruck aufrecht. Die Spitze der Pipette kann in ein kleines Loch eingeführt werden.
· Die Probe langsam und gleichmäßig entnehmen. Die Pipettenspitze wird über die Probenöffnung gesetzt, sodass die Probe in die Öffnung eindringt. Lassen Sie die Probe in die Öffnung einsinken, anstatt sie hineinzudrücken.
· Sobald der letzte Tropfen der Probe den Flüssigkeitskopf erreicht hat, bewegt sich die Flüssigkeit zum zweiten Bein, hebt die Flüssigkeitsbewegung langsam an und bewegt sich aus dem Puffer heraus
Wie führt man vertikale Klebstoffproben durch?
· Vertikale Klebepunkte bilden Probenlöcher zwischen zwei Glasplatten. Bei sehr dünnem Kleber lässt sich der Pipettenkopf nicht einmal zwischen zwei Glasplatten einführen. Vorsicht mit dem Glycerin! Setzen Sie den Pipettenkopf über das Probenloch, und die Probe sinkt in das Loch.
· Vor der Punktprobe unbedingt die senkrechte Spitze des Polypropylen-Acylgels ausspülen. Nicht polymerisiertes Acrylamid und eventuell am Boden der Probenöffnung vorhandenes Wasser entfernen. Das Wasser kann die Probenöffnung deutlich verkleinern. Verwenden Sie eine 25-ml- oder 50-ml-Spritze und eine 18-Gauge-Nadel. Den Elektrophoresepuffer einfüllen und die Probenöffnung vorsichtig spülen.
· Es kann schwierig sein, das Probenloch zu erkennen, der Rest ist jedoch einfach. Bei zu vielen Löchern kann der Probenpuffer mit Bromphenolblau getestet werden.
Veröffentlichungszeit: 31. März 2023